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過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒

產品簡介

過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒
POD廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物,具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。

產品型號:BC0090
更新時間:2025-08-06
廠商性質:生產廠家
訪問量:5630
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過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒說明書(分光光度法)

貨號:BC0090

規(guī)格:50管/48樣

產品簡介:

POD廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物,具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。

試驗中所需的儀器和試劑:

可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒產品內容:

提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;

試劑一:液體60mL×1瓶,4℃保存;

試劑二:液體×2瓶,4℃保存;用時每瓶加入5mL試劑一,現(xiàn)配現(xiàn)用;

試劑三:液體10mL×1瓶,4保存。

操作步驟:

一、粗酶液提?。?  

1、細菌、細胞或組織樣品的制備   

收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每500萬細菌或細胞加入1ml提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率200w,超聲3秒,間隔10秒。重復30次);8000g 4離心10分鐘,取上清,置冰上待測。

稱取約0.1g組織,加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g 4離心10分鐘,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

二、POD測定操作 

試劑名稱(μL)

測定管

試劑

520

試劑

130

試劑

135

蒸餾水

270

樣本

15

測定前將試劑一、二和三 37℃(哺乳動物)或25℃(其他物種)放置10min。在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑,加入樣本后立即混勻并計時,記錄470nm下30s時的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2。計算ΔA=A2-A1

注意:如果ΔA小于0.005,可將反應時間延長到5min。如果ΔA大于0.5,可將樣本提取液稀釋后測定,計算公式中乘以相應的稀釋倍數(shù)

POD活性計算:   

1、血清(漿)POD活力的計算:

單位的定義:每mL血清(漿)在反應體系中每分鐘使A470變化0.01定義為一個酶活力單位。

POD(U/L)=反應總體積(1070ul)÷樣本體積(15ul)÷0.01×ΔA=7133×ΔA

2、組織POD活力計算:

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每mg組織蛋白在反應體系中每分鐘使A470變化0.01定義為一個酶活力單位。

POD(U/mg prot)=反應總體積(1070ul)÷樣本體積(15ul)÷0.01×ΔA÷樣本蛋白濃度(mg/ml)=7133×ΔA÷樣本蛋白濃度(mg/ml)

(2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘使A470變化0.01定義為一個酶活力單位。

POD(U/g mass)=反應總體積(1070ul)÷樣本體積(15ul)÷0.01×ΔA÷樣本質量=7133×ΔA÷樣本質量

3、按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每1萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘使A470變化0.01定義為一個酶活力單位。

POD(U/104 cell)=反應總體積(1070ul)÷樣本體積(15ul)÷0.01×ΔA÷500(104 cell /mL)=14.27×ΔA

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